Perfil enzimático para la valoración del infarto agudo al miocardio.

Perfil enzimático para la valoración del infarto agudo al miocardio.

Varias enzimas cardíacas son de importancia clínica debido a que la detección de su liberación al torrente sanguíneo proporcionan un indicio sensible y específico de lesión y muerte de la célula miocárdica. Cuando muere la célula miocárdica se libera una gran cantidad de estas enzimas y su nivel puede ser determinado en la sangre.
Las enzimas deben ser: solubles y persistir en la circulación un tiempo suficientemente largo para poder ser detectadas.
Enzimas que permiten hacer el diagnóstico enzimático de infarto agudo al miocardio en forma aguda.

CK o CPK: creatinfosfoquinasa, isoenzima (MB).
LDH: Lactato deshidrogenada láctica.
AST: Aspartato aminotransferasa.

CPK muy elevada en músculo esquelético y miocárdico y, se encuentra en cantidades apreciables en el cerebro.
CPK: Valores aumentados en: pacientes con infarto de miocardio, distrofia muscular progresiva, delirium tremens.

Normales: en hepatitis, cualquier otra enfermedad hepática.

Valores inexplicablemente elevados en: infarto pulmonar y edema pulmonar.
Otras causas: ejercicio, infecciones intramusculares, reacciones sicóticos agudas.

CK total: se aumenta de 4 a 6 horas después del infarto, se mantiene por36 – 48 horas.
CK- MB se eleva 3 a 4 horas después del infarto agudo al miocardio, se mantiene por 24 horas a 36 horas, pico máximo a las 12 a 24 horas.

Fundamentos del método

El método se basa en la inhibición específica de las subunidades CK-M con anticuerpos monoclonales anti CK-M. Los anticuerpos inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M correspondientes a CK-MB. Las subunidades B se determinan mediante el empleo de un sistema reactivo basado en una técnica analítica optimizada por la IFCC, con N-acetilcisteína como activador, adicionado de anticuerpos monoclonales anti CK-M.

Muestra
Suero o plasma.
a) Recolección: obtener de la manera usual.
b) Aditivos: en el caso de que la muestra a emplear sea plasma, debe usarse heparina o EDTA como anticoagulante. Se recomienda anticoagulante W de Wiener lab.
c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros con hemólisis visible o intensa, producen valores falsamente aumentados, por lo que no deben ser usados.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la muestra debe ser fresca. Refrigerada (2-10 ºC) pierde hasta un 10% de actividad enzimática en un día.


Condiciones de reacción.
Longitud de onda: 340 nm.
Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37 ºC. seleccionar la temperatura de acuerdo al instrumental.

PROCEDIMIENTO

Llevar el aparato a cero con agua destilada. Ver indicios de inestabilidad de deterioro de los reactivos.
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada (25, 30 ó 37 ºC) colocar:

Sustrato reconstituido 2,5 ml
Preincubar unos minutos. Luego agregar:

* Muestra 100 ul

Mezclar inmediatamente por inversión. Esperar 10 minutos. Ajustar la absorbancia a un valor de referencia y disparar simultáneamente el cronómetro. Regisrar la absorbancia cada minuto, durante 5 minutos. Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min restando a cada lectura la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los cálculos.

Calculo de los resultados
CK-MB (U/l)= Delta abs/min * 8254.

Valores Referencia:

Temperatura: 25ºC, Valores 10 U/l
30 ºC, 16 U/l
37 ºC, 25 U/l

Interpretación de los resultados

Se tiene alta probabilidad de daño de miocardio si se cumplen simultáneamente las siguientes condiciones:
1- La actividad de CK total excede los siguientes rangos normales:

Temperatura 37ºC
Varones 24-195 U/l
Mujeres: 24-170 U/l

Si se sospecha daño de miocardio y los valores se encuentran por debajo del rango normal, existe la posibilidad de un infarto reciente. En este caso debe repetirse la determinación luego de 4 horas.
2- La actividad de CK-MB excede los valores normales. VER VALORES DE REFERENCIA.
3- El porcentaje de CK-MB se encuentra entre el 6-20 % del valor de CK total.
Si el porcentaje es menor al 6% es probable que haya daño del músculo esquelético. Si el porcentaje supera el 20% del valor total de CK se puede sospechar de la presencia de una forma macro de CK (CK atípica) que no es inhibida por los anticuerpos anti CK-M.

La presencia de CK atípica puede determinarse por:
a) Persistencia por más de 48 horas (la CK-MB decae aproximadamente a las 30-48 horas de iniciado el infarto).
b) Estabilidad frente al tratamiento de la muestra a 40ºC durante 20 minutos.
c) Análisis electroforético (se obtiene una banda entre las isoenzimas MM y MB).

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Muestras con actividad CK total que supera las 1000 U/l deben diluirse con solución fisiológica (cloruro de sodio 0,9%). El resultado obtenido debe multioplicarse por la dilución efectuada.

LACTATO DESHIDROGENASA

LDH: tiene origen en el riñón, hígado, músculo cardíaco, eritrocitos.

La elevación de LDH es muy inespecífica; la diferencia de un tejido a otro estriba en la variedad predominante de LDH. Aunque constituye un elemento importante de diagnóstico en el caso de infarto agudo miocardio.
Aumento a las 10 a 12 horas, pico máximo a los 2 – 3 días y continua durante a 10 días aproximadamente, por lo que fácilmente puede ser detectada.

FUNDAMENTOS DEL METODO

La enzima LDH cataliza la reacción reversible de lactato a piruvato, pudiendo utilizarse ambos como sustrato. Este reactivo se basa en el método de Wacker & Amador, y las modificaciones posteriores de Gay, Mc Comb y Bowers, tendientes a mejorar la linealidad del método y la duración del reactivo.

L- Lactato + Nad+ --------------à Piruvato + NADH + H+

En este caso , la enzima cataliza la oxidación de lactato a piruvato reduciendo el NAD a NADH. La concentración de LDH se determina midiendo el aumento de absorbancia a 340 nm a medida que se produce NADH.

MUESTRAS

Utilizar de preferencia suero libre de hemólisis obtenido por centrifugación. La hemólisis eleva falsamente la concentración de LDH. En lo posible desechar el uso de plasma debido a la interferencia de los anticoagulantes, de otra forma, utilizar solamente plasma heparinizado. No se requiere una preparación especial del paciente. La LDH es estable por 7 días entre 2º y 8º C. No congelar las muestras ya que se destruye la isoenzima de origen hepático.

TECNICA

- Llevar el reactivo a temperatura de reacción 30-37º C.
- Reactivo reconstituído 1 ml
- Volumen muestra 0,05 ml.

Mezclar y transferir a la cubeta, se incuba a 30 seg a la temperatura de reacción.
Leer absorbancia a 340 nm, repetir a intervalos de 60 segundos por 3 minutos.

RANGOS DE REFERENCIA

60 A 140 UI/L A 30ºC ---à 115 A 240 UI/L A 37º C


Reporte

Laboratorio deBioquimica Clinica. Grupo B

Perfil enzimatico para la valoracion de Infarto Agudo al Miocardio

Paciente: Fanny Rodriguez Sexo: Femenino

Edad: 24 años

CK MB: 24 U/L LDH: 175 U/L




Interpretación de los resultados

Valores positivos dentro del rango de referencia. No existe asociación con patología alguna.