sábado, 26 de abril de 2008

Universidad De Oriente
Núcleo Bolívar
Escuela De Ciencias De La Salud
Asignatura: Bioquímica Clínica
Laboratorio de Bioquímica Clínica.







Prof. Germán Guzmán Bachiller:

Rosangel Grüber






Cuidad Bolívar, abril de 2008
INDICE



Introducción ………………………………………………………………………………. 3
Colesterol total enzimático ……………………………………………………………….. 4
Preparación de mezclas control …………………………………………………………... 5
Cálculos ………………………………………………………………………………….. 6
Interpretación de las gráficas …………………………………………………………….. 6
Bibliografía ………………………………………………………………………………. 7








INTRODUCCION


Como en las numerosas operaciones matemáticas y técnicas efectuadas durante las determinaciones no siempre los resultados obtenidos serán los mas precisos o exactos, es necesario llevar a cabo métodos alternos para asegurar que se esté trabajando adecuadamente
La preparación de mezclas control como parte del programa de Control de Calidad de los laboratorios permiten mediante las diversas determinaciones analíticas originar seguridad y credibilidad en cada una de las determinaciones, así como confianza en el trabajo interno del laboratorio. Generalmente se recomienda elaborar un pool de suero que se prepara en el laboratorio y que debería durar de 6 meses a un año y con este suero como base se realiza dicho programa, mediante varios procedimientos.
Además se recurre a la elaboración de gráficas de Control de Calidad como la Gráfica de Levy-Jennings utilizada en el programa de Control de Calidad interno en un laboratorio y la Gráfica de Youden que se usa en el programa de Control de Calidad externo, es decir es entre distintos laboratorios. Si los controles no se encuentran dentro de los límites, se debe verificar el procedimiento y sistema analítico, además realizar nuevos controles que permitan obtener resultados más precisos y exactos y analizar conjuntamente con los pacientes. Si los resultados se encuentran dentro del rango o límites, se pueden reportar los nuevos datos.
















COLESTEROL TOTAL ENZIMATICO
Laboratorios BIOGAMMA C.A


Principios del Método

La determinación de Colesterol total esta basada en el procedimiento enzimático descrito por Allain, donde la colesterol-esterasa (CE) hidroliza los esteres de colesterol a colesterol libre y ácidos grasos. (4). En presencia de oxígeno, el colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa (CO) a cholest-4-en-3-one y peroxido de hidrógeno. Cuando el fenol está oxidativamente acoplado con 4-aminoantipirina en la presencia de peroxidada (HPO), y peróxido de hidrogeno se produce un cromóforo de quinonemina. La intensidad del color producido es proporcional a la concentración de colesterol y se mide colorimétricamente a/ o cerca de 500nm.

CE

Esteres de Colesterol ------ Colesterol + Ac. Grasos


Colesterol + O2 -------- Colest-4- en -3- one + H2O2

2H2O2+4-aminoantipirina+Fenol ----------- quinonerica + 4 H2O

La separación del HDL-colesterol, está basada en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las lipoproteínas con excepción del HDL-colesterol (5). Después de la centrifugación, el HDL-colesterol contenido en el líquido sobrenadante, se determina con el mismo método que se determinó el colesterol total.

Limitaciones del método

1) Niveles de Acido ascórbico (vitamina C) tan altos como 10mg% (cuatro veces mayores que los observados después de una masiva ingestión) no interfieren en la prueba.
2) El presente método de colesterol ha demostrado ser lineal hasta 500 mg/dl. Más allá de este límite, las muestras deberán diluirse con solución salina (0.85%) y ensayadas nuevamente. El nuevo resultado deberá multiplicarse por el factor de dilución.












PREPARACION DE MEZCLAS CONTROL

Para elaborar las muestras control que se utilizan para realizar el Control de Calidad dentro del laboratorio se utilizó una muestra de suero congelado, estos, tienen una gran ventaja. Por ser preparados en el laboratorio son de excelente calidad y reproducibilidad para el fin que se quiere lograr, el cual es demostrar que el laboratorio trabaja eficientemente y sus resultados son confiables.

La concentración del estándar de suero es = 200 mg/dl

La muestra mejor recomendada para la prueba es suero recién extraído no bemolizado.

Procedimiento:

1. Se utilizaron tres tubos, uno para la muestra, otro para el estándar y otro para el reactivo blanco.
2. Luego se agregó agua y reactivo de la siguiente manera:



Blanco reactivo Estándar Muestra
Reactivos 1 ml 1 ml 1 ml
Estándar 10 lambdas
Muestra 10 lambdas
Agua 10 lambdas

• Se tapan los tubos y mezclan por inversión.
• Incubación de los tubos 37º C por 5 minutos.
• Mezclar por inversión y se realizó la lectura a los 30 minutos siguientes.

Factor de calibración: 723, 4 mg/dl

Lecturas por días:

Día 1: 37 mg/dl
Día 2: 17 mg/dl
Día 3: 41 mg/dl
Día 4: 40 mg/dl
Día 5: 47 mg/dl
Día 6: 41 mg/dl
Día 7: 57 mg/dl
Día 8: 53 mg/dl
Día 9: 51 mg/dl
Día 10: 60 mg/dl
Día 11: 57 mg/dl


Cálculos

Para la realización de las Gráficas se elaboran los cálculos pertinentes Media, Desviación estándar y Varianza y, luego se establecen los intervalos, para posteriormente elaborar las gráficas correspondientes para control de calidad interno, Gráfica de Levy-Jennings y para control de calidad externo Gráfica de Youden.

Para realizar la Gráfica de Youden, se requieren dos sueros controles, uno de valores normales y otro de valores anormales, cada uno con la media y la desviación estándar conocida.
Las gráficas de control de calidad se realizan en papel milimetrado. En los ejes X, los días y, en Y la concentración en su unidad apropiada.


Interpretación de las graficas.

La gráfica de Levy-Jennings para control de calidad interno demostró que el trabajo realizado internamente por el Grupo B del Laboratorio de Bioquímica Clínica, fue bueno, todas las actividades se hicieron en buenas condiciones y eficientemente, puesto que los resultados obtenidos indicaron una excelente precisión y buena exactitud entre ellos, ya que se encontraban en la zona de confianza (Media mas o menos dos desviaciones estándar).
No hubo error de ningún tipo, ni se rompió ninguna de las reglas múltiples de Westgard que son la que se toman en consideración a la hora de evaluar los controles.

La gráfica de Youden para control de calidad externo o interlaboratorio demostró que no hubo una relación positiva entre el laboratorio de Bioanálisis de la Universidad de Oriente y el laboratorio de Winner Company, los valores medidos para colesterol mostraron mucha dispersión, evidenciando la incompatibilidad de los valores del Laboratorio de Bioanálisis de la Universidad de Oriente y el de Winner Company.




















BIBLIOGRAFIA


1. Castelli WP et al: “Circulación”, Supplement 11:51 y 52, 1975.
2. Castelli y Levitas IM: “Current Prescribing” 6:39, 1977.
3. Gordon T at al: “Am J Med”, 62:707, 1977.
4. Allain CC et al: “Clin Chem”: 20: 470, 1974.
5. Burstein M y Scholnick HR: “Adv Lipid Res” 11: 67, 1967.
6. Castelli y Levitas IM: “Current Prescribing” 6:30, 1977.
7. Wright IS: “JAMA” 236: 261, 1976.
8. Lopes—Virella MF et al: “CLIN CHEM” 23:5, 1977
9. American Heart Association: Dietary Treatment of Hypercholesterolemia”, 1988
10. American Heart Association: Guidelines for healthy American Adults, 1986
11. BDM: “Clin Chem News Laboratory Guide to Chlesterol Testing”, 1988.

Henry, J (1993). Diagnóstico y Tratamiento Clínico por el Laboratorio. 9ª Edición. Masson-Salvat; México, D.F.

Kaplan, L y Pesce, A. (1996). Química Analítica. Panamericana, Buenos Aires.